分子互作研究

引物合成

基因服務(wù)&測(cè)序

蛋白抗體服務(wù)

細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)

表觀遺傳

分子/免疫學(xué)檢測(cè)

其他

首頁技術(shù)服務(wù) 分子互作研究 Co-IP

Co-IP

蛋白質(zhì)復(fù)合物鑒定
蛋白質(zhì)相互作用
信號(hào)傳導(dǎo)研究
疾病機(jī)制解析

服務(wù)特色

Co-IP技術(shù)是研究蛋白質(zhì)相互作用的重要方法之一，通過對(duì)蛋白質(zhì)復(fù)合物的免疫沉淀和分析，可以揭示蛋白質(zhì)相互作用的組成和功能，為理解生物過程和疾病機(jī)制提供重要的信息。

在線詢價(jià)

服務(wù)內(nèi)容

服務(wù)介紹
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
服務(wù)流程
客戶提供
服務(wù)說明
案例展示
Q&A

服務(wù)介紹

免疫共沉淀技術(shù)（Co-Immunoprecipitation,Co-IP）是一種研究兩種蛋白在體內(nèi)是否存在相互作用的有效方法，通過抗體和已知蛋白結(jié)合，從而捕獲整個(gè)已知蛋白復(fù)合物，進(jìn)而研究復(fù)合物中與已知蛋白存在相互作用的蛋白。

服務(wù)優(yōu)勢(shì)

直接檢測(cè)蛋白質(zhì)與其他分子（如蛋白質(zhì)、DNA或RNA）之間的相互作用，提供了定性和定量信息。
可以在原生條件下進(jìn)行，更接近細(xì)胞內(nèi)環(huán)境，有助于揭示生物體內(nèi)的相互作用。
可以研究復(fù)雜的蛋白質(zhì)復(fù)合物，包括多個(gè)亞基或較大的蛋白質(zhì)復(fù)合物。
可以通過驗(yàn)證和功能研究進(jìn)一步驗(yàn)證相互作用的生物學(xué)功能。

服務(wù)流程

接收訂單及樣品

樣品裂解液制備、定量

樣品、抗體、protein A/G-凝膠孵育

沉淀收集、洗滌、制樣

WB檢測(cè)

結(jié)果交付

客戶提供

1、需檢測(cè)的樣品，一抗（也可以選擇由金開瑞提供）。

2、送樣要求：

? 離體后迅速超低溫處理并-80℃凍存的組織樣品，干冰運(yùn)輸；

? 組織：動(dòng)物組織不少于400 mg；植物組織不少于2 g；

? 細(xì)胞：2x10^7個(gè)細(xì)胞。

服務(wù)說明

服務(wù)名稱	服務(wù)內(nèi)容	交付內(nèi)容及標(biāo)準(zhǔn)	服務(wù)周期(工作日)
免疫共沉淀Co-IP	蛋白提取	1 個(gè)樣本	16
	Co-IP前wb	跑膠1個(gè)泳道
	Co-IP	富集2次：IgG、IP各1次
	Co-IP后誘餌蛋白wb	跑膠3個(gè)泳道：IgG、IP、input
	SDS-PAGE銀染	跑膠3個(gè)泳道：IgG、IP、input	4
	質(zhì)譜鑒定互作蛋白	質(zhì)譜鑒定：IgG、IP	10-15

案例展示

在線課堂

COIP實(shí)驗(yàn) 操作流程

常見問題與解析 (Q&A)

Q：IP與CoIP區(qū)別？

免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）是利用抗原抗體特異性反應(yīng)純化富集樣品中目的蛋白的一種方法。通常使目標(biāo)蛋白同抗體-protein A/G形成免疫復(fù)合物沉淀而得以收集，然后通過WB檢測(cè)目的蛋白。免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CO-IP）是將樣品中同抗體靶蛋白相互作用的蛋白一同隨免疫復(fù)合物沉淀，可以檢測(cè)兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)存在相互作用，也可以確定一種蛋白在體內(nèi)的相互作用蛋白。

Q：coIP需要準(zhǔn)備多少樣本量？

coIP實(shí)驗(yàn)需要保證足夠的蛋白濃度才能維持原本存在的蛋白互作狀態(tài)，尤其當(dāng)?shù)鞍棕S度較低、相互作用力不強(qiáng)、使用不易提蛋白組織等情況時(shí)。而且coIP的實(shí)驗(yàn)條件往往需要反復(fù)摸索。因此用于coIP實(shí)驗(yàn)需準(zhǔn)備細(xì)胞＞2x10^7，動(dòng)物組織＞500mg，植物組織＞2g，并且須更加注意采集后速凍-80℃保存和避免反復(fù)凍融。

Q： coIP實(shí)驗(yàn)成敗的主要因素？

a.所使用的抗體不僅需要優(yōu)秀的親和力、特異性，其識(shí)別表位還可能被互作蛋白所掩蔽（主要是使用單抗時(shí)）； b.當(dāng)?shù)鞍谆プ黜毎l(fā)生在特定生理代謝條件、組織細(xì)胞類型之中時(shí)，coIP實(shí)驗(yàn)可能無法獲得互作結(jié)果； c.如果誘餌蛋白和或捕獲蛋白在樣本中豐度很低時(shí)； d.兩個(gè)互作蛋白的親和力較弱； e.當(dāng)該蛋白互作需要較特定的離子強(qiáng)度，或者需要如Ca離子/Mg離子/ATP等輔因子時(shí)，要?jiǎng)?chuàng)造合適的反應(yīng)條件會(huì)變得困難； f.一些樣品處理提取存在難度，提取足量目的蛋白與保持蛋白天然狀態(tài)，需通過實(shí)驗(yàn)條件達(dá)到優(yōu)化平衡； g.外源表達(dá)的標(biāo)簽蛋白存在同內(nèi)源蛋白的位點(diǎn)競爭，這主要在使用標(biāo)簽抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)可能存在。

Q：CoIP實(shí)驗(yàn)成功的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)是什么？

在coIP-WB鑒定結(jié)果中，IgG組無目的蛋白條帶、IP組有目的蛋白條帶，說明IP過程成功；銀染膠圖中，IP組相對(duì)于IgG組有更多蛋白條帶、且存在差異，說明coIP過程捕獲到互作蛋白；IP產(chǎn)物在質(zhì)譜檢測(cè)中鑒定到的蛋白數(shù)量不能作為判斷實(shí)驗(yàn)成敗的標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)檫@取決于目的蛋白本身所具有的互作蛋白數(shù)量、結(jié)合力強(qiáng)弱等方面；IP產(chǎn)物的質(zhì)譜鑒定數(shù)量越多并不代表結(jié)果越好。