
ChIP-seq
- 三次質控
- 自用抗體平臺
- 項目經驗豐富
服務特色
ChIP-seq是目前最成熟的蛋白質與DNA互作研究方法,金開瑞自有抗體平臺、檢測分析平臺,前后三次質控,可最大限度的保障實驗成果率。
服務介紹
ChIP-seq(Chromatin ImmunoPrecipitation Sequencing)是染色質免疫共沉淀和第二代高通量測序技術的結合,通過組蛋白/轉錄因子的特異性抗體,將特定的蛋白與DNA復合物沉淀下來。從而獲取結合的DNA片段,再通過高通量測序技術,即可獲得相應的片段信息。
服務優勢
- 項目前后三次質控,保障實驗成功率;
- 金開瑞自有抗體生產團隊,選擇抗體經驗豐富;
- 細胞、植物、動物都有大量經驗。
服務流程
客戶提供
根據《武漢金開瑞表觀項目送樣指南》提供實驗的樣品,并提供ChIP級別抗體(公司可以提供選購意見)。
樣品信息單:需詳細填寫樣品來源、含量、狀態及其他基本信息。
最終交付
- 項目報告與數據:
- 測序數據質量評估:過濾掉低質量數據,保證數據質量
- 與參考基因組比對:reads分布及比對結果可視化
- peak峰calling:分析蛋白結合位點
- motif分析:蛋白結合序列的偏好性
- peak峰相關基因注釋:尋找蛋白潛在調控基因
- 差異peak分析:分析不同樣本間差異peak峰
- 相關基因功能分析:相關基因GO, KEGG富集分析
服務說明
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產品 |
測序數據量 |
平臺 |
周期(自然日,提取+測序分析) |
備注 |
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組蛋白ChIP-seq |
8G |
illumina |
45 |
需要組間比較時,每組至少兩個生物學重復,每個樣本會進行ChIP和Input測序 |
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轉錄因子ChIP-seq |
6G |
illumina |
45 |
需要組間比較時,每組至少兩個生物學重復,每個樣本會進行ChIP和Input測序 |
案例展示
常見問題與解析 (Q&A)
通常是≥10ng。隨著目前建庫技術的不斷完善,低至5ng的DNA量也能被建庫成功;少數測序公司為了降低自身風險提出20ng的要求,通過可以協商降低該送樣要求。尤其是一些轉錄因子,最終能夠捕獲的DNA量會很低。
通常是≥10ng。隨著目前建庫技術的不斷完善,低至5ng的DNA量也能被建庫成功;少數測序公司為了降低自身風險提出20ng的要求,通過可以協商降低該送樣要求。尤其是一些轉錄因子,最終能夠捕獲的DNA量會很低。
如果ChIP下來的DNA樣品量非常少,在樣品制備過程中通常需要經過一步PCR擴增的過程,PCR擴增主要是為了獲得足夠上機反應的DNA量。如果客戶能夠提供足夠量的DNA樣品,那就不需要再進行PCR擴增。由于是線性擴增,擴增前后的結果很相似,基本上不會影響測序結果。抗體的質量,特異性,ChIP的實驗操作,實驗設計方法,DNA片段長度范圍,測序通量和質量等都會影響ChIP-Seq的結果。
(1)染色質開放程度的不均一性、DNA打碎方法、PCR擴增偏向性、基因組的重復程度以及測序和序列比對過程中的錯誤都會引入系統誤差造成假陽性,測序后首先將序列比對到已知基因組上并確立真正的結合位點。 (2)對于轉錄因子,要尋找“峰”對應的下游調控基因(靶基因),或者構建轉錄因子結合位點的保守結合序列,如果轉錄因子的motif是已知的,則可以計算“峰”序列中包含motif序列的百分比,間接估計實驗結果的可靠性。
相關資源
1、ChIP-seq技術的實驗步驟:
● 交聯與裂解:交聯細胞或組織中蛋白質與DNA的相互作用,然后裂解細胞核,釋放染色質。
● 免疫沉淀:使用特定抗體對目標蛋白質進行免疫沉淀,富集與該蛋白質結合的染色質片段。
● 反交聯與DNA純化:解除交聯,將富集的染色質片段純化出來。
● 文庫構建:對富集的DNA片段進行文庫構建,將其轉化為可測序的DNA文庫。
● 高通量測序:對構建好的DNA文庫進行高通量測序,產生數百萬個短的DNA序列讀數。
● 數據分析:將測序數據進行比對,將序列讀數映射到參考基因組上,并根據比對結果尋找與特定蛋白質結合的染色質區域。
2、ChIP-seq技術在基因組學研究中有著廣泛的應用,包括但不限于:
● 轉錄因子結合位點鑒定:ChIP-seq可以幫助鑒定轉錄因子與基因組上的結合位點,揭示轉錄因子對基因調控的作用。
● 組蛋白修飾分析:ChIP-seq可以用于檢測不同組蛋白修飾在基因組上的分布,如甲基化、乙酰化等,揭示染色質狀態和基因表達的調控。
● 基因調控網絡研究:ChIP-seq可以幫助構建基因調控網絡,找出轉錄因子和其他調控因子與靶基因的相互作用關系。
● 疾病研究:ChIP-seq可以用于研究特定蛋白質在疾病發生和發展中的作用,如癌癥等。
● 藥物靶點發現:ChIP-seq可以幫助鑒定新的藥物靶點,為藥物研發提供新的目標。
3、ChIP-seq數據庫資源和網站:
● ENCODE ChIP-seq Data Portal:
ENCODE是一個重要的國際合作項目,其ChIP-seq Data Portal提供了大量的ChIP-seq數據和相關的實驗信息。用戶可以通過該網站獲取不同細胞類型和條件下的ChIP-seq數據。(encodeproject.org/data-standards/chip-seq/)
● GEO - Gene Expression Omnibus:
GEO是一個公共數據庫,提供了許多ChIP-seq數據集,包括原始的測序數據和已經分析過的結果。可以通過關鍵詞搜索或瀏覽數據集來獲取感興趣的ChIP-seq數據。(ncbi.nlm.nih.gov/geo/)
● ChIP-Atlas:
ChIP-Atlas是一個綜合性的ChIP-seq數據庫,提供了廣泛的ChIP-seq數據集和相關的元數據信息。它支持ChIP-seq數據的交互式可視化和數據下載。(chip-atlas.org)
● Cistrome Data Browser:
Cistrome Data Browser是一個基因組調控數據的綜合性數據庫,包括ChIP-seq數據和相關的基因表達數據,可以用于基因調控網絡的研究。(cistrome.org/db/#/)
● UCSC Genome Browser:
UCSC Genome Browser是一個廣泛使用的基因組瀏覽器,它提供了許多公開共享的ChIP-seq數據集,并且可以與其他組學數據進行整合展示。(genome.ucsc.edu/)
● ChIPseeker:
ChIPseeker是一個R包,用于ChIP-seq數據的注釋和可視化,可以幫助研究者解釋和分析ChIP-seq結果。(bioconductor.org/packages/release/bioc/html/ChIPseeker.html)



