等溫滴定微量熱(ITC)
- 無需標(biāo)記
- 獲得完整熱力學(xué)參數(shù)
- 高靈敏度
- 樣品可回收
服務(wù)特色
ITC技術(shù)是直接測(cè)量分子相互作用熱力學(xué)性質(zhì)的"金標(biāo)準(zhǔn)"方法。通過一次實(shí)驗(yàn)即可同時(shí)獲得結(jié)合常數(shù)(KD)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(n)、焓變(ΔH)、熵變(ΔS)和吉布斯自由能(ΔG)等全套熱力學(xué)參數(shù)，為深入理解分子識(shí)別機(jī)制、藥物設(shè)計(jì)和優(yōu)化提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)支撐。
服務(wù)介紹
等溫滴定微量熱(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)是一種直接、無需標(biāo)記的生物物理技術(shù)，用于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和量化分子間的相互作用。該技術(shù)通過精確測(cè)量結(jié)合過程中釋放或吸收的熱量，提供分子相互作用的完整熱力學(xué)圖譜。
ITC能夠在接近生理?xiàng)l件下工作，對(duì)樣品無特殊要求(如固定、標(biāo)記或修飾)，保持分子的天然狀態(tài)，提供最真實(shí)的相互作用數(shù)據(jù)。一次ITC實(shí)驗(yàn)即可同時(shí)測(cè)定結(jié)合親和力(KD)、化學(xué)計(jì)量比(n)、焓變(ΔH)和熵變(ΔS)，從而計(jì)算出吉布斯自由能(ΔG)。
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
- 通過多維度實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠，并支持一對(duì)一高效服務(wù)， 快速交付結(jié)果；
- 擁有頂尖的分子互作檢測(cè)平臺(tái)，配備了Nano ITC等先進(jìn)設(shè)備；
- 提供全方位配套服務(wù)（比如蛋白純化、SPR、MST BLI等）；
- 不干擾蛋白質(zhì)和核酸的生理功能，具有非特異性的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，即被研究蛋白質(zhì)和核酸體系的溶劑性質(zhì)、光譜性質(zhì)和電學(xué)性質(zhì)等沒有任何限制；
- 方法靈敏度高，可測(cè)的親和力范圍從102-1012/M都可以實(shí)現(xiàn)，測(cè)量時(shí)不需要制成透明溶液；
- 量熱實(shí)驗(yàn)完畢的樣品未遭破壞，還可以進(jìn)行后續(xù)生化分析。
服務(wù)流程
客戶提供
a、蛋白推薦干粉，質(zhì)量>300μg；
b、小分子推薦粉末，質(zhì)量>1mg；
c、核酸送樣量>10 OD；
d、干冰運(yùn)輸足量，出于保存難度，蛋白?般不做返樣
服務(wù)說明
適用范圍：
蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)（包括抗原-抗體、分子伴侶-底物)、蛋白質(zhì)-核酸、核酸-核酸、核酸-小分子、生物分子-細(xì)胞相互作用、酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)等，可以檢測(cè)任意兩種小分子之間的結(jié)合力，要求檢測(cè)樣品的純度高。
測(cè)試參數(shù)：結(jié)合常數(shù)KD、化學(xué)計(jì)量比n、熱力學(xué)參數(shù)dH，dS
技術(shù)對(duì)比：
| 項(xiàng)目 | 核心優(yōu)勢(shì) | 蛋白需求量（最低） | 小分子需求 | 核酸送樣量 | 提供參數(shù) | 適用范圍 |
| SPR | 檢測(cè)“金標(biāo)準(zhǔn)”，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)結(jié)合與解離全過程,無需標(biāo)記,保持分子天然狀態(tài) | 50ug | 1mg | 5OD |
結(jié)合常數(shù)KD |
（蛋白/核酸）和另一種可以計(jì)算摩爾濃度的物質(zhì) |
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結(jié)合速率常數(shù)Ka |
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解離速率常數(shù)Kd |
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| MST | 在自由溶液中進(jìn)行，無需固定、樣品消耗少、接近真實(shí)生理狀態(tài) | 50ug | 1mg | 5OD | 結(jié)合常數(shù)KD | （蛋白/核酸）和另一種可以計(jì)算摩爾濃度的物質(zhì) |
| BLI | 適合快速篩選與粗樣檢測(cè) | 50ug | 1mg | 5OD |
結(jié)合常數(shù)KD |
（蛋白/核酸）和另一種可以計(jì)算摩爾濃度的物質(zhì) |
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結(jié)合速率常數(shù)Ka |
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解離速率常數(shù)Kd |
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| nanoITC | 直接測(cè)量結(jié)合熱，提供最完整的熱力學(xué)全景圖 | 300ug | 1mg | 10OD |
結(jié)合常數(shù)KD |
任意兩種可計(jì)算摩爾濃度的物質(zhì) |
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化學(xué)計(jì)量比n |
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熱力學(xué)參數(shù)dH，dS |
常見問題與解析 (Q&A)
ITC（等溫滴定量熱法）實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品有以下要求：
1.樣品類型與純度
大分子樣品（如蛋白質(zhì)、核酸等）：純度建議≥90%，可通過SDS-PAGE或SEC-HPLC等方法驗(yàn)證，確保無雜質(zhì)干擾。
小分子樣品：純度需≥95%，需提供準(zhǔn)確的分子量和化學(xué)式。
2.樣品濃度
大分子濃度：通常為10-100μM，具體需根據(jù)預(yù)估的解離常數(shù)（KD）調(diào)整，理想情況下C值（即大分子濃度與KD的比值）介于10-100之間。
小分子濃度：一般為大分子濃度的10-25倍，確保滴定結(jié)束時(shí)配體過量，以獲得完整結(jié)合等溫線。
ITC可以檢測(cè)弱相互作用，它能直接測(cè)量反應(yīng)體系中放出或吸收的熱量，是研究分子間弱相互作用最有效的實(shí)驗(yàn)手段之一。
