服務介紹
酵母雙雜交及系統是一種鑒定和檢測蛋白質相互作用的研究方法，因其具有靈敏性高、功能強大、適用范圍廣等特點，現已被應用于多個研究領域。
核蛋白酵母雙雜交：
核蛋白酵母雙雜交技術最初由Fields等人在研究酵母轉錄因子GAL4性質時建立，后續經過不斷改進已發展成為一種成熟的蛋白-蛋白互作研究工具，具有簡便、靈敏、可反映蛋白在活細胞內互作真實情況的特點，被廣泛應用于互作蛋白的篩選、蛋白相互作用的鑒定/驗證、蛋白互作機理的探究、蛋白連鎖圖譜繪制等工作。
膜蛋白酵母雙雜交：
DUALmembrane技術在傳統的酵母雙雜交系統的基礎上，巧妙地利用分離的泛素系統(split-ubiquitin) 進行蛋白質相互作用的篩選；泛素作為降解信號分子，人為分成兩部分：N端 (Nub)，C端 (Cub)，互補重構的完整泛素分子可被泛素專一性蛋白酶(UBPs)識別，從而導致與泛素相連的蛋白被酶解。
服務優勢
- 一站式輔助檢測手段方便快捷，得到可靠的實驗結論；
- 多年文庫構建經驗，4種優化的Total RNA提取技術方案可以有效保證Total RNA的純度和完整性，保證樣本的多樣性。
- 直接檢測蛋白質之間的相互作用，而不依賴于其他分子或細胞的參與；
- 可同時篩選和鑒定多個蛋白質間的相互作用，實現高通量的篩選和分析；
- 采用多個篩選步驟，如報告基因的驗證和酵母菌株的雙重選擇，可以減少非特異性相互作用的假陽性結果；
- 可通過報告基因的表達水平定量評估蛋白質相互作用的強度，進一步了解相互作用的動力學和功能。
服務說明
服務流程
酵?雜交?庫構建：
酵母單雜交文庫篩選
酵母雜交驗證：
| 服務項目 | 應用 | 互補實驗 |
| 酵?雜交?庫構建 | 酵?雜交篩選 | / |
| 核酵?雙雜交篩選 | 獲得與已知蛋?互作的未知蛋? | COIP，GST pulldown |
| 膜酵?雙雜交篩選 | 研究膜蛋?之間的互作 | COIP，GST pulldown |
| 酵?單/雙雜交驗證 | 已知蛋?與蛋?/啟動?之間的互作 | EMSA，雙熒光素酶，COIP，GST pulldown |
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服務項目 |
客戶提供 | 最終交付 |
| 文庫構建 |
組織/細胞 |
滴度在1×10cfu/mL以上的酵母文庫菌液；文庫PCR鑒定結果圖片(陽性率在90%左右) |
| 文庫篩選 |
蛋白序列/基因序列/質粒 |
篩選過程中的全部原始圖片；篩選獲得所有相互作用的獵物蛋白的測序結果 |
案例展示
相關技術服務
| ? 雙熒光素酶報告系統 | ? CO-IP | ? EMSA |
| ? RNA pull-down | ? RIP-qPCR | ? DNA pull-down |
| ? ChIP-qPCR | ? 酵母單雜交 | ? CUT&Tag |
相關資源
一、酵母雙雜交技術與其他實驗方法結合使用，進一步驗證和深入研究相互作用的結果。以下是一些常見的與酵母雙雜交技術結合使用的實驗方法和技術：
● 共沉淀實驗（Co-immunoprecipitation）：通過共沉淀實驗可以驗證在酵母雙雜交中發現的蛋白質相互作用是否在真實生物環境中發生。該實驗通過特定抗體與目標蛋白質結合，并隨后使用免疫沉淀技術將與其相互作用的蛋白質一起沉淀下來，以進一步證實相互作用的存在。
● 免疫熒光染色（Immunofluorescence Staining）：通過免疫熒光染色可以確定蛋白質相互作用的亞細胞定位和動態變化。該技術使用特定抗體與目標蛋白質結合，并通過熒光標記的二抗或熒光標記的蛋白質結合域來可視化相互作用的位置和形式。
● 酶聯免疫吸附實驗（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）：ELISA可以定量測定蛋白質之間的相互作用強度。通過將酵母細胞裂解提取的蛋白質與特定抗體結合，再用標記的二抗和酶底物進行檢測，可以測定相互作用的強度。
● 蛋白質結構分析技術：例如X射線晶體學和核磁共振等技術，可以用于解析蛋白質相互作用的三維結構，進一步了解相互作用的機制和結構特征。
● 蛋白質組學分析：通過質譜技術（如質譜聯用技術）可以鑒定和定量測定與目標蛋白質相互作用的蛋白質。這種方法可以提供更全面的蛋白質相互作用網絡信息。
● 基因表達分析：通過基因表達分析方法（如實時定量PCR、RNA測序等），可以確定與目標蛋白質相互作用的基因的表達水平的變化。這有助于了解蛋白質相互作用對基因調控的影響。
● 細胞熒光共定位分析：通過將熒光蛋白標記的蛋白質與目標蛋白質共表達，通過熒光顯微鏡觀察它們在細胞中的共定位情況，可以進一步證實它們的相互作用。
● 組織特異性表達分析：通過組織特異性表達分析方法（如原位雜交、免疫組化等），可以確定與目標蛋白質相互作用的基因在不同組織中的表達模式，從而了解蛋白質相互作用的組織特異性。
● 代謝標記技術：通過代謝標記技術（如蛋白質生物素標記、蛋白質熒光標記等），可以跟蹤和定量測定蛋白質相互作用的時空動態變化。
二、研究蛋白質之間相互作用的方法簡介、應用場景、優劣勢及優化建議
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方法 |
簡介 |
應用場景 |
優劣勢 |
優化建議 |
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酵母雙雜交 （Yeast Two-Hybrid） |
利用酵母細胞內的轉錄激活和檢測系統， 篩選和鑒定蛋白質之間的相互作用 |
揭示蛋白質相互作用網絡、調控機制、代謝途徑等生物過程 |
優勢：高通量篩選、生理相關性、定量分析能力； 限制：非自然環境、假陰性結果 |
選擇適當的誘餌和獵物構建策略，優化培養條件， 使用高靈敏性檢測系統進行驗證， 增加篩選步驟和互補技術進行驗證。 |
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（Co-immunoprecipitation） |
利用特異性抗體富集目標蛋白質及其結合的互作伙伴 | 研究蛋白質復合物的組成、結構和功能 |
優勢：生物相關性、較低的假陽性率、定性和定量分析能力； 限制：特異性抗體的選擇、技術復雜性 |
選擇合適的抗體，進行前處理步驟以減少非特異性結合， 使用對照實驗驗證結果，結合其他技術進行互補驗證。 |
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表面等離子體共振 （Surface Plasmon Resonance，SPR） |
監測蛋白質結合到傳感芯片表面的光學信號變化 | 評估蛋白質結合的動力學、親和力和特異性 |
優勢：高靈敏度、實時監測； 限制：設備和實驗技術的要求 |
選擇適當的傳感芯片和結合條件，優化實驗參數和流速， 增加對照實驗和質控步驟，優化數據分析和解釋。 |
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核磁共振 （Nuclear Magnetic Resonance，NMR） |
通過測量核磁共振譜來研究蛋白質的結構和相互作用 | 研究蛋白質的折疊狀態、結合界面和動態變化 |
優勢：高分辨率、提供結構和動態信息； 限制：設備和技術要求、樣品的制備和穩定性 |
選擇適當的標記方式和溶劑條件，優化樣品純度和濃度， 選擇適當的NMR實驗方案，優化數據采集和處理以提高信噪比。 |
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光學顯微技術 （Fluorescence Microscopy） |
觀察蛋白質在細胞內的動態分布和相互作用 | 研究蛋白質相互作用的時空動態、細胞信號傳導和調控機制 |
優勢：實時觀察、非侵入性； 限制：需標記蛋白質、分辨率和深度的限制 |
選擇合適的標記方法和探針，優化成像條件和細胞處理步驟， 使用高分辨率成像系統和圖像分析軟件進行定量和定性分析。 |
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GST pull-down |
利用GST-融合蛋白將目標蛋白質及其結合的互作伙伴富集， 通過親和純化和檢測來分析相互作用 |
鑒定蛋白質相互作用、篩選結合伙伴、研究蛋白質結構和功能 |
優勢：簡單易行、高純度富集、適用于大規模篩選； 限制：需蛋白質的表達和純化、可能存在非特異性結合和假陽性 |
優化選擇合適的GST標簽和親和純化條件， 進行對照實驗和負對照實驗， 結合其他技術進行互補驗證， 使用高靈敏性檢測方法進行驗證。 |
三、酵母雙雜交技術適用于多個研究領域，包括但不限于以下方面：
● 蛋白質相互作用研究：酵母雙雜交技術廣泛應用于研究蛋白質之間的相互作用網絡。通過識別和驗證蛋白質間的相互作用關系，可以揭示蛋白質復合物的組成和結構，從而深入了解細胞信號傳導、轉錄調控、代謝途徑等生物過程。
● 蛋白質功能研究：通過酵母雙雜交技術，可以研究蛋白質的功能和調控機制。例如，通過識別蛋白質與轉錄因子、核酸結合蛋白等的相互作用，可以了解蛋白質在基因調控中的作用，以及調控網絡的建立和維持。
● 藥物研發：酵母雙雜交技術可應用于藥物研發領域。通過篩選藥物分子與靶蛋白之間的相互作用，可以評估藥物的潛在效果和副作用，優化藥物設計，加速藥物發現過程。
● 疾病研究：酵母雙雜交技術可用于研究與疾病相關的蛋白質相互作用。通過篩選與疾病相關基因的相互作用蛋白質，可以揭示疾病的發生機制，尋找潛在的治療靶點。
● 進化生物學研究：酵母雙雜交技術可以用于研究物種間的蛋白質相互作用。通過比較不同物種中的相互作用網絡，可以了解蛋白質相互作用的進化變化，探究物種適應性和進化的基礎。
總而言之，酵母雙雜交技術在多個研究領域具有廣泛的應用。它為研究蛋白質相互作用、揭示蛋白質功能和調控機制、藥物研發和疾病研究等提供了有力的實驗工具和方法。
