ChIP試劑盒（植物）
| 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 數(shù)量 |
|---|---|---|
| JKR23002P |
實(shí)驗(yàn)原理
染色體免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是用來研究蛋白質(zhì)與DNA是否在體內(nèi)存在相互作用,這項(xiàng)技術(shù)幫助研究者判斷在細(xì)胞核中基因組的某一特定位置會(huì)出現(xiàn)何種組蛋白修飾。利用抗體抗原特異性結(jié)合,將與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段沉淀下來,能夠真實(shí)地反映結(jié)合在DNA序列上的調(diào)控蛋白。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
• 快速樣本處理：采用優(yōu)化的裂解緩沖液，顯著縮短染色質(zhì)片段化時(shí)間（30分鐘內(nèi)完成），避免傳統(tǒng)方法過長(zhǎng)的耗時(shí)問題。
• 多物種兼容：支持人類、小鼠、大鼠、植物等樣本，適用細(xì)胞系、組織、冷凍樣本等多種類型。
• 小規(guī)格包裝：避免試劑浪費(fèi)，尤其適合經(jīng)費(fèi)有限的實(shí)驗(yàn)室
應(yīng)用范圍
• 蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究
• 組蛋白修飾分析
• 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)定位
• 表觀遺傳學(xué)研究
• 疾病機(jī)制研究和基因表達(dá)調(diào)控
實(shí)驗(yàn)流程
試劑盒組分
常見問題與解答
Q1:怎么探索超聲條件
1)接觸式超聲儀:取2mLEP管,加入1.4mL液體,將探頭置于EP管中心,液面下約一半的位置,設(shè)置超聲時(shí)間為10S,逐漸增加功率,直至開始起泡,此時(shí)功率為超聲最大功率。在此基礎(chǔ)上設(shè)置三個(gè)不 同的功率梯度和時(shí)間梯度進(jìn)行探索。
2)非接觸式:可按廠家推薦進(jìn)行探索。
Q2:超聲后片段不符合要求
1)有符合要求的片段也有比較集中無法超聲的大片段,可能是交聯(lián)溫度過高,交聯(lián)時(shí)始終保持溫度低于25℃,尤其是夏天溫度較高可將試劑和樣本放置空調(diào)出風(fēng)口一段時(shí)間再進(jìn)行操作。
2)片段很集中且小于200bp,超聲功率和時(shí)間不合適,需要做預(yù)實(shí)驗(yàn)探索最佳超聲條件。
Q3:IP和IgG樣本Ct值沒有差異
1)抗體沒有富集到DNA,可更換抗體嘗試。
2)lgG背景過高,可增加洗滌次數(shù)或減少免疫沉淀步驟DNA投入量。
3) 結(jié)合位點(diǎn)預(yù)測(cè)錯(cuò)誤,需重新設(shè)計(jì)引物。
Q4:溶解曲線異常
溶解曲線非單一峰,可能為非特異擴(kuò)增或有引物二聚體等情況,需重新設(shè)計(jì)引物。
Q5:樣本DNA濃度很低,低于10ng/μL
1)樣本投入量過少:考慮增加樣本初始投入量,尤其是肌肉,心臟等。
2)裂解不完全:樣本過度交聯(lián)或研磨不充分。
3) 如遇難裂解樣本可在加入LysisBuffer后-80℃急速冷凍,37°C解凍,反復(fù)凍融3次。
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