siRNA合成（三保一）
- 專業(yè)算法優(yōu)化三條序列
- 批次高一致性
- 最小化脫靶風(fēng)險(xiǎn)
服務(wù)特色
金開瑞配備了先進(jìn)齊全的實(shí)驗(yàn)設(shè)備，涵蓋各種規(guī)格的全自動合成儀以及尖端的純化系統(tǒng)。依托多年成熟的siRNA合成經(jīng)驗(yàn)，公司已成功構(gòu)建并完善了一整套高效、精準(zhǔn)的siRNA合成及純化技術(shù)體系。這一體系確保了金開瑞能夠穩(wěn)定地提供高純度、高活性的siRNA產(chǎn)品，為科研工作者提供可靠的實(shí)驗(yàn)材料。
服務(wù)介紹
小干擾RNA（siRNA）是一種人工設(shè)計(jì)的短雙鏈RNA分子，是RNA干擾（RNAi）技術(shù)中的核心工具，能夠特異性地降解靶標(biāo)信使RNA（mRNA），從而實(shí)現(xiàn)基因沉默。目前，化學(xué)合成法是最常用且高效的siRNA制備方式，它通過固相合成技術(shù)精確地合成所需序列的RNA單鏈，再退火形成雙鏈siRNA。這種方法能快速提供高純度的定制化siRNA，為研究基因功能、藥物靶點(diǎn)篩選及開發(fā)新型療法提供了關(guān)鍵材料。
本公司?產(chǎn)的siRNA均為常規(guī)化學(xué)?法合成21-25nt的雙鏈?RNA。經(jīng)HPLC純化，可直接?于細(xì)胞轉(zhuǎn)染使?。產(chǎn)品劑型為凍?粉，產(chǎn)品劑量經(jīng)過嚴(yán)格測算，以摩爾數(shù)標(biāo)明。
服務(wù)優(yōu)勢
- 獨(dú)家專利技術(shù)設(shè)計(jì)siRNA，在保證細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率（≥80%）的前提下，siRNA可達(dá)到70%以上的沉默效果；
- 售后：若經(jīng)qRT-PCR鑒定，套餐中3對siRNA均未達(dá)到70%或以上的沉默效果，如核實(shí)為siRNA設(shè)計(jì)問題，則重新設(shè)計(jì)并免費(fèi)合成針對靶基因的另外3對siRNA。特殊物種（除人，大鼠，小鼠以外）及l(fā)ncRNA除外。
服務(wù)流程
客戶提供
準(zhǔn)確地提供 siRNA 的 19 個核苷酸的靶序列和懸垂的合成物或者需要設(shè)計(jì)的基因名稱和基因序列及要求，（如果是做三保一，需要交由金開瑞設(shè)計(jì)，客戶提供的序列不做保證型套餐）。
最終交付
- siRNA 三條各2管（1OD/管，合計(jì)2OD），3個對照各1管（1OD），1管DEPC水（1mL），合計(jì)10管；
- 訂單基因信息文件；
- 檢測報(bào)告；
- siRNA使用說明書。
服務(wù)說明
|
siRNA三保一套餐內(nèi)容 |
規(guī)格 | 純化方式 |
|
目的基因siRNA oligos |
3對(3×2 OD) | HPLC |
|
陰性對照siRNA oligos |
1對(1×1 OD) | HPLC |
|
FAM標(biāo)記陰性對照siRNA oligos |
1對(1×1 OD) | HPLC |
|
陽性對照siRNA oligos |
1對(1×1 OD) | HPLC |
|
DEPC水 |
1mL | / |
常見問題與解析 (Q&A)
已經(jīng)有為數(shù)不少的實(shí)驗(yàn)室研究過熒光標(biāo)記的 siRNA 的熒光檢測結(jié)果和 knockdown 效率之間的正相關(guān)關(guān)系。熒光標(biāo)記雙鏈?zhǔn)亲畛Ｓ玫膬?yōu)化轉(zhuǎn)染條件的方法。可以用流式細(xì)胞儀或者熒光共聚焦顯微鏡檢測標(biāo)記的 siRNA。
使用什么樣的轉(zhuǎn)染方法，很大程度上取決于您使用的細(xì)胞系： 1.貼壁的、易轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，我們推薦 使用 Lipofectamin 2000 或 siRNA Mate 轉(zhuǎn)染試劑。 2.懸浮的或原代的細(xì)胞，我們推薦使用電擊轉(zhuǎn)化方法；3.電擊轉(zhuǎn)化效率仍然很低的細(xì)胞，需要選擇載體系統(tǒng)。
最常見的影響沉默效果的兩個原因是：轉(zhuǎn)染效率低和 siRNA 序列設(shè)計(jì)的效果不理想。如果您初次使用 siRNA 或采用了新的細(xì)胞系，并發(fā)現(xiàn)沉默效果不佳，我們建議您對轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行檢測，并選擇優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件。如果您已經(jīng)對實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化但是問題依然存在，我們建議您換用另一種轉(zhuǎn)染試劑或是采用其他技術(shù)，這也許能提高轉(zhuǎn)染效率。如果已經(jīng)提高了轉(zhuǎn)染效率但是沉默效果仍然未達(dá)到要求，可能是因?yàn)閟iRNA序列設(shè)計(jì)的效果不理想。
1. 無論您用什么轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)染時(shí)盡量不要加血清，血清里面的小分子會與siRNA競爭性進(jìn)入細(xì)胞，會影響轉(zhuǎn)染效率，也有說血清里含有RNA酶，會將siRNA給降解掉。 2. 轉(zhuǎn)染后一般推薦8-12h換液，這時(shí)可以加血清與正常培養(yǎng)細(xì)胞一樣。 3. 轉(zhuǎn)染前應(yīng)根據(jù)細(xì)胞種類、生長速度等因素決定轉(zhuǎn)染時(shí)的細(xì)胞密度。推薦細(xì)胞密度在60%-80%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。 細(xì)胞密度過低將影響檢測結(jié)果。siRNA會隨著細(xì)胞增殖降低在細(xì)胞內(nèi)的濃度。例如：轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度50%，轉(zhuǎn)染效率達(dá)到100%，siRNA的有效率也100%，36h后細(xì)胞長滿平皿進(jìn)行檢測。最后提的是總RNA沉默效率可能只有50-60%。細(xì)胞密度過大，如超過90%，也會影響轉(zhuǎn)染效率且后期細(xì)胞會由于密度過大生長情況受到影響無法得到理想實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
